کاربرد تکنیک ELISA در صنعت طیور

آنچه یاد خواهید گرفت:

• آزمایش‌های ایمونولوژیک و تشخیص بیماری‌های طیور
• مقدمه‌ ELISA - انسداد غیرمستقیم
• بازیکن کلیدی در پاسخ ایمنی
• کیت‌های آزمایش ELISA

پیش‌نیازهای دوره

• مبانی ایمنی‌شناسی، مبانی بیماری‌های طیور و مبانی ELISA

توضیحات دوره

• آنتی‌ژن (Ag) - هر ماده‌ خارجی که یک پاسخ ایمنی (یعنی تولید مولکول‌های آنتی‌بادی خاص) را هنگامی که به بافت‌های یک حیوان مستعد وارد می‌شود، برمی‌انگیزد و قادر است با آنتی‌بادی‌های خاصی که تشکیل شده‌اند، ترکیب شود.
• آنتی‌ژن‌ها معمولاً دارای وزن مولکولی بالا هستند و غالباً پروتئین‌ها یا پلی‌ساکاریدها می‌باشند.
• آنتی‌ژن‌هایی که پاسخ‌های ایمنی قوی ایجاد می‌کنند، به شدت ایمنوژنیک هستند.
• ناحیه‌ کوچک روی یک آنتی‌ژن که یک آنتی‌بادی به آن متصل می‌شود، اپی‌توپ نامیده می‌شود.
• رایج‌ترین آنتی‌ژن‌ها، ویروس‌ها و باکتری‌ها هستند.
• آنتی‌بادی (Ab) - یک ایمونوگلوبولین که قادر به ترکیب خاص با آنتی‌ژنی است که تولید آن در یک حیوان مستعد را برمی‌انگیزد.
• آنتی‌بادی‌ها در پاسخ به حمله‌ مولکول‌های خارجی (آنتی‌ژن‌ها) در بدن تولید می‌شوند.
• آنتی‌بادی‌ها به صورت یک یا چند کپی از یک واحد به شکل Y وجود دارند.
• تفاوت بین آزمایش‌های انسداد و ELISA غیرمستقیم و ELISA غیرمستقیم
• مجموعه‌ گسترده‌ای از واریانت‌های آنتی‌بادی به صفحه متصل خواهد شد.
• کنژوگه یک کنژوگه IgG ضد‌گونه‌ای است که به تمام آنتی‌بادی‌های متصل شده قبلی متصل می‌شود.
• بسیار حساس است، اما احتمال کمی وجود دارد که آنتی‌بادی‌های غیرخاص به صفحه متصل شوند که منجر به نتایج مثبت کاذب شود.
• ELISA غیرمستقیم و ELISA انسدادی
• فقط می‌تواند برای گونه‌های خاصی بسته به کنژوگه‌ای که در آزمایش استفاده می‌شود، استفاده شود.
• مقدار کنژوگه متصل شده به سطح آنتی‌بادی در نمونه متناسب است.
• نتایج کمی می‌توانند محاسبه شوند (S/P)
• ELISA انسدادی (رقابتی)
• مجموعه‌ی گسترده‌ای از واریانت‌های آنتی‌بادی به صفحه متصل خواهد شد.
• کنژوگه یک آنتی‌بادی مونوکلونال (آنتی‌بادی خاص) است که فقط به یک اپی‌توپ خاص روی صفحه‌ دارای پوشش، متصل می‌شود، اگر این فضا قبلاً توسط آنتی‌بادی‌ای از نمونه اشغال نشده باشد.
• بسیار خاص است، مهم نیست که آیا اتصالات غیرخاصی به سایر قسمت‌های صفحه اتفاق افتاده است، زیرا این موضوع توسط کنژوگه شناسایی نخواهد شد.
• نسبت معکوس به سطح آنتی‌بادی در نمونه (هر چه آنتی‌بادی‌های بیشتری در نمونه وجود داشته باشد، توسعه رنگ در چاهک‌های آزمایش کمتر خواهد بود).
• به گونه وابسته نیست، زیرا کنژوگه به طور مستقیم به آنتی‌ژن روی صفحه متصل می‌شود.
• ایمونواسبی‌ها نقش حیاتی در کنترل و پیشگیری از بیماری‌های طیور دارند. آنها اجازه می‌دهند که از شیوع بیماری‌ها به طور زودهنگام مطلع شوید که به پیشگیری از گسترش بیماری و کاهش ضررهای اقتصادی کمک می‌کند. همچنین برای پایش کارآمدی برنامه‌های واکسیناسیون و اطمینان از ایمنی محصولات طیور استفاده می‌شوند.
• تشخیص بیماری‌های طیور فرآیند شناسایی علت بیماری یا ناراحتی در طیور است. این امر برای اطمینان از سلامت و تندرستی پرندگان، جلوگیری از گسترش بیماری و حفظ ایمنی محصولات طیور برای مصرف انسانی حیاتی است.

فرآیند تشخیصی:

تشخیص بیماری‌های طیور معمولاً شامل یک فرآیند چند مرحله‌ای است:

• مشاهده بالینی - این امر شامل مشاهده طیور برای نشانه‌های بیماری مانند کسالت، کاهش اشتها، مشکلات تنفسی، اسهال یا رفتارهای غیرعادی است.
• جمع‌آوری نمونه - نمونه‌هایی مانند خون، بافت‌ها یا مدفوع ممکن است از پرندگان بیمار یا از محیط برای آزمایش‌های بیشتر جمع‌آوری شوند.
• تحلیل آزمایشگاهی - آزمایش‌های مختلفی برای شناسایی عامل ایجاد بیماری به کار می‌روند. این آزمایش‌ها ممکن است شامل:
  • ایمونواسی‌ها - همانطور که قبلاً ذکر شد، این آزمایش‌ها حضور آنتی‌بادی‌ها یا آنتی‌ژن‌های مربوط به پاتوژن‌های خاص را شناسایی می‌کنند.
  • باکتری‌شناسی - این امر شامل کشت باکتری‌ها از نمونه‌ها برای شناسایی گونه باکتری خاصی است که باعث بیماری می‌شود.
  • ویروس‌شناسی - این امر شامل جداسازی و شناسایی ویروس‌های موجود در نمونه‌ها است.
  • انگل‌شناسی - این امر شامل شناسایی انگل‌هایی است که ممکن است در پرنده یا محیط آن وجود داشته باشند.
  • کالبدشکافی - در برخی موارد، ممکن است کالبدشکافی پرندگان متوفی برای شناسایی نشانه‌های بیماری و کمک به تشخیص انجام شود.

اهمیت تشخیص بیماری‌های طیور:

تشخیص دقیق و به‌ موقع بیماری‌های طیور برای چندین دلیل حیاتی است:

• تشخیص و درمان زودهنگام - شناسایی به موقع علت بیماری امکان اجرای اقدامات درمانی مناسب را فراهم می‌کند و شانس بهبودی موفق را افزایش داده و مرگ و میر طیور را کاهش می‌دهد.
• کنترل و پیشگیری از بیماری - شناسایی زودهنگام شیوع‌ها به جلوگیری از گسترش بیماری در داخل طیور و به سایر آنها کمک می‌کند. این امر به ویژه برای بیماری‌های بسیار واگیر مانند آنفلوانزای پرندگان مهم است.
• ایمنی غذایی - تشخیص و کنترل بیماری‌ها در طیور ایمنی محصولات طیور را برای مصرف انسانی تضمین می‌کند و خطر بیماری‌های ناشی از غذا را کاهش می‌دهد.
• پایش سلامت پرندگان - آزمایش‌های تشخیصی منظم به پایش سلامت کلی پرندگان و شناسایی مشکلات بالقوه در مراحل اولیه کمک می‌کند.

تکنیک‌های تشخیصی مختلف:

چندین تکنیک تشخیصی در تشخیص بیماری‌های طیور به کار می‌روند که هر کدام مزایا و محدودیت‌های خود را دارند:

• ایمونواسی‌ها - همانطور که قبلاً بررسی شد، این آزمایش‌ها بسیار خاص و حساس هستند و می‌توانند به سرعت پاتوژن‌ها یا آنتی‌بادی‌ها را در طیور شناسایی کنند.
• واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) - این یک تکنیک بسیار حساس است که برای شناسایی وجود توالی‌های خاص DNA پاتوژن‌ها استفاده می‌شود.
• آسیب‌شناسی بافتی - این امر شامل بررسی نمونه‌های بافتی زیر میکروسکوپ برای شناسایی تغییرات میکروسکوپی مرتبط با بیماری است.
• سرولوژی - این امر شامل اندازه‌گیری سطح آنتی‌بادی‌ها در خون برای ارزیابی قرار گرفتن در معرض پاتوژن‌های خاص است.

کیت‌های آزمایش ELISA

• سریعاً آنتی‌ژن‌ها یا آنتی‌بادی‌های ضد باکتری‌ها، ویروس‌ها و سایر پاتوژن‌ها را شناسایی و کمیت‌دهی می‌کند.
• بادوام و کاربرپسند است.
• یکی از حساس‌ترین و قابل تکرارترین روش‌های آزمایش موجود است.

کیت‌های آزمایش ELISA

• آزمایش تعداد زیادی نمونه به طور همزمان
• فرآیند را با استفاده از رباتیک یا سایر دستگاه‌های خودکار اتوماسیون کنید.
• استفاده از نرم‌افزار برای محاسبه و گزارش نتایج 

اجزای کیت آزمایش

• صفحات دارای پوشش
• کنترل مثبت و منفی
• رقیق‌کننده نمونه
• کونژوگه (همیوغش)
• سابستریت (TMB)
• استاپ
• محلول شستشو

استفاده از آزمایش ELISA

• ابزاری با حساسیت بالا برای غربالگری
• نتایج نیاز به تفسیر در سطح پرندگان با دانش سلامت پرندگان دارند.
• ELISA تعداد بسیار کمی از نتایج مثبت کاذب می‌دهد.
• نتایج مثبت غیرمنتظره باید توسط سیستم آزمایش دیگری تأیید شوند (HI، کشت، IPMA، وسترن بلات، فیکساتور مکمل، PCR و VI)
• این آزمایش به شما نخواهد گفت که آیا آنتی‌بادی‌های شناسایی‌ شده، آنتی‌بادی‌های مادری، ناشی از واکسیناسیون یا ناشی از عفونت هستند (به عنوان مثال، آزمایش تمایز بین حیوانات آلوده و واکسینه شده [DIVA])

روش‌های خوب آزمایشگاهی 

• دریافت کیت‌ها
• بررسی آسیب
• ثبت تاریخ دریافت و زمان استفاده
• ذخیره‌سازی صحیح طبق دستورالعمل‌های ضمیمه کیت
• توجه به تاریخ انقضای کیت
• نحوه‌ عمومی کار با مواد شیمیایی
• پیروی از دستورالعمل‌های ضمیمه (بارها برای بازبینی چک کنید)
• گرم کردن مواد شیمیایی (2-3 ساعت)
• مخلوط کردن مواد شیمیایی
• اجتناب از آلودگی (هیچ back pour انجام نشود، از مخزن‌های مخصوص مواد شیمیایی استفاده کنید)
• مدیریت مواد شیمیایی

این دوره برای چه کسانی مناسب است؟

• دامپزشکان، تمام افرادی که به صنعت طیور علاقه‌مند هستند، تکنسین‌های آزمایشگاه و دانشمندان آزمایشگاه